摘要：目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)蛋白在食管鳞癌中的表达及其与临床病理指标的相关性。方法应用免疫组化二步法检测CXCR4蛋白在食管癌及癌旁正常组织中表达情况。结果CXCR4在食管癌及癌旁正常组织表达的阳性率分别为65.17％、10.00％，前者明显高于后者，差异有显著性意义(P<0.001)。CXCR4蛋白在不同浸润深度T1、T2、13表达的阳性率分别为41.18％、62.50％、77.50％；在pTNM分期分别为I、Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ时，其表达的阳性率分别为40.00％、63.04％、82.14％，差异均有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移表达的阳性率为78.38％，无淋巴结转移表达的阳性率为55.77％，差异有统计学意义(P<0.05)。S100A4蛋白在食管癌中的表达与组织分化程度、病变长度、性别及年龄无关(P>0.05)。结论CXCR4蛋白表达参与食管鳞癌发生、发展过程，与其侵袭、转移密切相关。
关键词：CXCR4；食管；鳞状细胞癌中图分类~：R735.1 文献标志码：A 文章编号：1672-4208(2011)20-0022-03
食管癌是世界上常见的消化道肿瘤，位于全球肿瘤发病率的第8位，严重威胁人类健康。我国是食管癌高发国家，世界上每年约30万人死于食管癌，其中约一半是中国人。本文应用免疫组化法检查食管癌旁正常粘膜和食管鳞癌组织中CXCR4蛋白的表达情况，探讨其在食管癌发生、发展中的作用，为食管癌的防治和预测预后提供新的思路及理论依据。现报道如下。
1 资料和方法
1.1一般资料 收集泰山医学院附属医院2004年2月-2009年10月经病理或细胞学证实而行食管癌根治术的鳞癌患者89例，术前未行局部放疗或全身化疗，既往无肿瘤病史。其中男55例，女34例；年龄34-72岁，中位年龄52岁；根据2009版AJcC／UICc TNM分期标准确定临床分期。
1.2试剂及方法 兔抗人CXCR4多克隆抗体及免疫组织化学染色二步法试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司，4℃冰箱保存。染色步骤：(1)制作4μxm厚石蜡切片；(2)将石蜡切片置于65cC烤箱中，脱蜡；(3)二甲苯中脱蜡，梯度酒精水化；(4)微波法对组织抗原进行修复；(5)过氧化酶阻断液，以阻断内源性过氧化物酶活性；(6)滴加第一抗体，保湿盒中4℃冰箱中过夜；(7)滴加山羊抗兔IgG抗体一HRP多聚体，入保湿盒37℃孵育30 min；(8)加入新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察2～10分钟；(9)苏木素复染，氢氧化氨水溶液中返蓝；(10)梯度酒精脱水，二甲笨中透明；(11)干片后用中性树胶封片。实验中以已知阳性片作为阳性对照，以PBS液代替一抗作为空白对照。
1.3结果判断 根据染色强度及着色面积判断。染色强度分4级：无着色计O分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。在400倍光镜下随机观察5个不同视野，据阳性细胞占总细胞数百分率计分：<5％为O分；5％～25％为1分；26％～50％为2分；51％～75％为3分；>75％为4分。用细胞数得分和强度得分的乘积作为判断表达结果，积分≤1为阴性，>1为阳性。
1.4统计学处理 采用SPSS13.0软件进行统计分析，率的比较采用矿检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1cxcR4在食管癌及癌旁正常组织中的表达CXCR4蛋白阳性表达定位于细胞质和(或)细胞膜，呈棕黄色，部分胞核着色，见图1、图2。20例癌旁正常组织2例阳性，阳性率10.00％；89例食管癌患者58例阳性，阳性率65.17％。食管癌与癌旁正常组织表达相比差异有显著性意义(x2=20.085，P<0.001)。
2.2CXCR4表达与食管癌临床病理指标关系CXCR4蛋白在不同浸润深度T1、12、T#表达的阳性率分别为(41.18％、62.50％、77.50％)，差异有统计学意义(x2=7.091，P<0.05)。在病变长度分别为≤3cm、3～5 cm、>5cm时，其表达的阳性率分别为(40.00％、67.50％、73.53％)，差异无统计学意义(x2=5.329，P>0.05)。在pTNM分期分别为I、Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ时，其表达的阳性率分别为(40.00％、63.04％、82.14％)，差异有统计学意义(x2=7.832，P<0.05)。有淋巴结转移表达的阳性率为78.38％，无淋巴结转移表达的阳性率为55，77％，差异有统计学意义(x2=4.868，P<0.05)。CXCR4蛋白在食管癌中的表达与性别、年龄及分化程度无关(x2=0.281，P>0.05；2=0.589，P>0.05；=1.504，P>0.05)。见表1。
3 讨论
食管癌是由食管粘膜上皮或腺体恶变产生的，我国食管癌患者约90％以上为鳞状细胞癌，腺癌次之约占3.8％～8.8％，其发生为多因素协同作用所致。食管癌是恶性程度较高的肿瘤，侵袭及转移是恶性肿瘤的两个最主要的生物学特征，亦是治疗失败和死亡的主要原因。CXCR4是趋化因子(SDF-1)的唯一受体，它们相互作用形成生物学轴SDF-1／CXCR4在肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用。CXCR4是趋化因子(SDF-1)的受体，SDF-1是基质细胞衍生因子，属趋化因子CXC亚家族，命名为CXCLl2，是一标记CXCR4的自身稳定的趋化因子，在红细胞生成和免疫系统中起重要的作用。与其他趋化因子不同，SDF-1由骨髓基质细胞持续产生，其它趋化因子由炎症诱导产生。CXCR4和SDF-1广泛表达于正常细胞，如免疫细胞、内皮细胞、树突细胞、神经元等；在肝脏、肺、淋巴结、肾上腺、骨髓等器官组织表达；肿瘤细胞和基质细胞也分泌SDF-1和(或)表达CXCR4。SDF-l与CXCR4结合后可以引起JAK2和JAK3结合到CXCR4上，激活STAT信号通路，导致相关基因转录增加，肿瘤细胞增殖、粘附、运动能力增加，导致肿瘤侵袭和／或转移。酸性环境和低氧环境可上调细胞CXCR4表达，增加细胞运动能力，运动到正常的含氧环境。而HIF-1和NF-KB既可上调CXCR4表达，也可上调SDF-1表达。SDF-1通过激活细胞表面黏附分子调节细胞与周围环境的黏附功能。CXCR4信号调节细胞表面黏附分子功能，黏附分子也影响CXCR4表达，形成相互促进的循环。SDF-I／CX-CR4生物轴可引起NF—KB激活，人类巨噬细胞分泌的MMPs和血管内皮细胞生长因子则依赖于PI-3K／AKT／NF-KB轴。
研究发现CXCR4在23种肿瘤中有不同程度的表达，是在肿瘤中表达最普遍的趋化因子受体。Masahiro等在侵袭性乳腺导管癌组织中的研究表达发现，CXCR4表达阳性与患者淋巴结转移相关。Li等的研究认为CXCR4高表达乳腺癌患者预后较差。Kim等关于结直肠癌的研究表明，CXCR4高表达与肿瘤的复发、肝脏转移相关，并且患者预后较差。其功能包括调节肿瘤血管生成、以自分泌或旁分泌方式刺激肿瘤细胞增殖、激活宿主对肿瘤细胞的特异免疫应答以及通过CXCLl21 CXCR4信号轴控制肿瘤细胞转移。
Sasaki等应用免疫组化法对食管鳞癌组织中CXCLl2与CXCR4的表达进行检测，CXCR4的表达率为84.6％，其表达与淋巴结转移、肿瘤分期和淋巴浸润有关。Jussuf等研究发现CXCR4的表达与食管癌淋巴结转移相关，多因素分析CXCR4的表达是患者生存的独立危险因素。卢春来等研究发现，肿瘤组织CXCR4的表达与食管鳞癌分化、大小、浸润深度、淋巴结转移以TNM分期相关。本研究发现其表达在食管癌组织表达显著增高，与癌旁正常组织相比有显著性差异，随肿瘤浸润的加深，表达增强，在淋巴结转移组其表达高于无转移组，并随分期的增高，阳性率升高，差异有统计学意义。提示其参与食管癌的发生、发展，与肿瘤的侵袭、转移能力相关，有一定的预后价值，这有待于进一步大样本资料的研究证实。
