摘要：针对巴西龟(Trachemys seripta elegans)在广东养殖过程中发生慢性死亡的现象，对病龟肠道病例组织学和病原学进行了研究，并对病龟开展了防治实验。结果表明：病龟肠道前中段上皮细胞有虫体寄生，分离到圆形至椭圆形的卵囊，平均大小为11.7μm×13.8μm。每个孢子化卵囊含4个孢子囊，每个孢子囊内有2个子孢子；经过人工感染的幼龟肠道中段粘膜层有病原侵入，并出现纤维素性炎症。通过分析确认此病症为艾美耳球虫(Eimeria coecidium)感染所致。对病龟采用抗球虫药磺胺氯吡嗉进行治疗，有一定的治疗效果。
作者简介：1．广东省农业科学院兽医研究所，广州，510640
2．华南农业大学兽医学院，广州，510642
巴西龟(Trachemys scripta etegans)具有抗病力强、杂食、生长快等特点，可作为食用、观赏或宠物饲养，近几年人工养殖发展较快。龟在自然环境中一般较少发生疾病，但在集约化养殖条件下可发生较多疾病，如肠胃炎、消化不良等。2004年—2005年，广东两个龟鳖养殖场出现龟种每天死亡五十多只的情况，死亡率约为10％，并且该病病程较长，用抗菌药、消毒药如环丙沙星、蒽诺沙星、土霉素或三氯异氰脲酸等控制无效。针对这一情况，笔者对这两个龟鳖养殖场的发病情况进行了调查，并取数只患病龟作了病理组织学观察和病原分离研究，以期为龟类病害防治研究提供基础资料。
1 材料与方法
1．1实验材料
患病龟：20只，体重800—1500g，取自广东两个龟鳖养殖场。固定液为10％中性福尔马林溶液。健康巴西龟：6只，体重50—100g，购自广东佛山花鸟市场，外观正常、健康，粪检无异常。胰蛋自酶为上海生物工程技术服务有限公司生产(批号：20050802)。
1．2患病龟的病理学诊断
1．2．1解剖观察
对病龟进行解剖，并观察记录主要症状和病理变化。
1．2．2病理组织切片与观察
取胃肠各断组织分别置于10％中性福尔马林液中固定24小时后取出，修剪成5mm左右的组织块，经流水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，切片厚度为4μm，HE染色，在光学显微镜下观察。
1．2．3细菌分离与鉴定
无菌操作取肝、肾、脾组织，接种普通肉汤、平板培养基，30％培养18小时，观察有无细菌生长。若能分离到细菌则作进一步鉴定。
1．2．4卵囊分离实验
收取病龟肠道内容物并刮取肠道粘膜，加胰蛋白酶消化，过滤，离心镜检，拍摄卵囊图片，测定卵囊大小。
1．3健康龟感染实验
每只龟口服9万个孢子化卵囊，置小盆饲养，观察致病情况。20天后剖检观察肠道病变，并取样作组织切片，镜检。
1．4病龟的治疗实验
内服0.06％磺胺氯吡嗪钠药饵，连用3天，剖检肠道病变恢复情况，判定治疗效果。
2 结果
2．1病龟的主要症状与病变
病龟爬上岸，活力减弱，精神不振，食欲下降。贫血消瘦，腹泻，然后呈慢性死亡态势，而外表无任何症状(图1)。剖检发现胃肠空虚，胃后一节肠道膨大，尤其是前、中断肠发生不同程度的病变，出现充血、出血、肿胀、增厚，纤维素性炎症，肠粘膜坏死、脱落，形成豆腐渣样肠内容物(图2)。严重者整个肠粘膜几乎全部脱落，引起肠道堵塞。
显微观察可见病龟小肠肠粘膜脱落，绒毛结构异常，其中红细胞浸润增多。肠上皮细胞坏死脱落，出现大量圆形、球形的卵囊及裂殖体样物寄生，呈串珠状散在性排列。粘膜下层充血、水肿，淋巴细胞与嗜酸性粒细胞浸润。肠淋巴组织明显增生，肠腺中杯状细胞增多，有少量淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润。浆膜下层小血管充血或出血。部分未脱落粘膜的固有层中聚集有大量大型的第二代裂殖体(含许多香蕉形裂殖子)，其周围有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润。详见图3、图4。
2．2病原分离与鉴定结果
2 2．1球虫卵囊分离
刮取小肠中断粘膜及其内容物，剪碎，镜检发现球虫裂殖体。收集粪便后过滤、漂浮、离心、镜检，检出卵囊。从肠道粘膜刮取未孢子化卵囊，加入2.5％重铬酸钾溶液，室温培养，每隔2h取样，镜检其孢子化情况。
经检测卵曩为淡绿黄色，圆形、椭圆形或卵圆形。曩壁为两层，外层为外膜，起保护作用。原生质呈颗粒状，一端有极帽。每个孢子化卵曩有4个孢子囊，每个孢子囊内有2个子孢子，大小为(10～13.5)u m×(11.O～16.2)μm，平均为11.7μm×13.8μm，孢子化时间约20～30小时，孢子化率为75％～85％。结合已有的研究结果[5，6]，证实该球虫卵囊为艾美耳球虫(Eimeria coccidium)卵囊。如图5，6所示。
2．2．2细菌分离
大部分病龟的脏器未分离到细菌。有小部分病龟可分离到革兰氏阴性杆菌，经生化试验初步鉴定为产气产酸的假单胞杆菌，由此表明部分病龟混合感染艾美耳球虫与假单胞杆菌。
2．3健康龟的感染试验结果
健康幼龟口服9万个艾美耳球虫孢子化卵囊5天后，食道、胃粘膜、肠后段粘膜无病变，而肠道中断出现轻微病变症状。接种卵囊9天后收集粪便，镜检发现卵囊，经鉴定与接种卵囊类同。口服卵囊4天后，中断肠粘膜充血，粘膜下层充血、水肿及淋巴细胞与嗜酸性粒细胞浸润；口服卵囊6天后，可见肠腺上皮中寄生有小配子体，主要形态为圆形。
2．4病龟治疗试验结果
病龟饲喂抗球虫药3天后，死亡龟明显减少，剖检5只病龟发现其肠道病变明显减少，吃食量增加，5天后基本恢复正常水平，说明治疗效果较好。
3 讨论
艾美耳球虫病(Eimeria coccidiosis)是一种可危害多种动物的肠道寄生原虫病。其主要危害幼龄动物，患病动物表现为腹泻，肠道发生病变。艾美耳球虫的孢子化卵囊含有4个孢子囊，每个孢子囊内有2个子孢子。它们主要寄生在肠上皮细胞，使肠道呈现水肿、充血、卡他性出血过程，表现出急性或慢性坏死性肠炎症状。目前国内外对畜禽艾美耳球虫病诊治研究较多，而淡水鱼类、龟类球虫的诊治研究报道很少。已有的研究显示，淡水鱼体内常见的有青鱼艾美耳球虫。
